到1936年6月两广事变发生时，蒋军被迫调走大量正规军开往两广边境，局势对湘鄂赣红军变得更为有利。
傅秋涛虽然不明白蒋军撤退的具体原因，但仍趁机下令第二次重建红16师。
此时全师辖700余人，师长仍是方步舟，政委则是刘玉堂。
刘玉堂，原名刘金启，1913年出生于江西兴国，曾任江西少先队省队长，1933年随陈寿昌被派往湘鄂赣苏区，曾任苏区组织部部长在方步舟、刘玉堂的指挥下，红16师三次出击，连战连捷，部队扩大到1000余人。
这期间刘玉堂负伤离队，由明安楼接任师政委。
西安事变后，蒋氏加强了对南方各红军游击队的进攻，方步舟对此没有思想准备，在梅田战斗中遭敌人包围，部队受到了些损失。
傅秋涛对此很生气，下令解除方步舟职务并给予处分，引起方步舟的思想波动。
这时方步舟身怀六甲的妻子也被蒋军捉住，这个奋战了十多年的老战士终于万念俱灰，只身投降了蒋军。
事后傅秋涛紧急任命冯育云为红16师代师长，并下令部队转移，但蒋军根据方步舟提供的情报，早已设下埋伏。
激战过后，傅秋涛仅率200余人突围而出，这是红16师第三次遭到覆灭性的损失！
方步舟是继孔荷宠之后湘鄂赣苏区的又一个大叛徒，在他的蛊惑下，包括代师长冯育云在内的不少原红16师指战员都先后放下武器。
他们本来就是方步舟的老部下。受叛徒招降和蒋军围剿的影响，到改编成新四军前，红16师连同各地方武装总数只剩500余人，不少坚持了三年的老战士倒在了黎明来临之前。
1938年1月，合作抗日后，原红16师被改编成新四军第1支队第1团。
原师政委明安楼在劝说赣北游击队下山时，被对方错杀。
原师长方步舟叛变后，又于1949年率部在浙江反正。